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凝膠制備液相色譜儀的調整原則和進樣方式

更新時間:2018-07-11 點擊次數(shù):2033
凝膠制備液相色譜儀分析方法開發(fā)中流動相的調整原則:
1、由強到弱:一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進行試驗,可很快得到分離結果,然后根據(jù)出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
2、三倍規(guī)則:每減少10%的有機溶劑(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加約3倍,此為三倍規(guī)則。調整時注意觀察各個峰的分離情況。
3、粗調轉微調:當分離達到一定程度時,應將有機溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調整率,直至各組分的分離情況不再改變。

凝膠制備液相色譜儀的進樣方式
1.隔膜進樣。用微量注射器將樣品注進專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內,可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,死體積幾乎即是零,可以獲得的柱效,且價格便宜,操縱方便。但不能在高壓下使用;此外隔膜輕易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應,使進樣重復性只能達到1~2%;加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到,常規(guī)分析使用受到限制。  
2.停流進樣??杀苊庠诟邏合逻M樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點是保存時間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中,效果較好。  
3.閥進樣。一般HPLC分析常用六通進樣閥,其關鍵部件由圓形密封墊和固定底座組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在,柱效率低于隔膜進樣,但耐高壓,進樣量正確,重復性好,操縱方便。  
4.自動進樣。用于大量樣品的常規(guī)分析。  
早期使用隔膜和停流進樣器,裝在凝膠制備液相色譜儀進口處?,F(xiàn)在大都使用六通進樣閥或自動進樣器。進樣裝置要求:密封性好,死體積小,重復性好,保證中心進樣,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。

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